氰基羥基亞氨基乙酸乙酯

氰基羥基亞氨基乙酸乙酯（oxyma）是氰基乙酸乙酯的肟，可用作碳二亞胺的添加劑，如肽合成中的二環己基碳二亞胺（DCC）。由于其明顯的酸性（pKa4.60），它可以作為DCC的堿性或親核性的中和試劑，并抑制堿催化的副反應，特別是消旋反應。

氰基羥基亞氨基乙酸乙酯在氰基乙酸乙酯和亞硝酸（來自亞硝酸鈉和乙酸）的反應中得到，收率為87%。由于酯的快速水解，反應應在pH4.5下進行，在緩沖的磷酸中，甚至可以得到幾乎定量的產品。該化合物可以通過從乙醇或乙酸乙酯中重結晶來提純。與苯并三唑衍生物1-羥基苯并三唑（HOBt）和1-羥基-7-氮雜苯并三唑（HOAt）（它們被廣泛用作肽連接試劑，但具有爆炸性）相比，氰基羥基亞氨基乙酸乙酯在加熱時表現出明顯的慢熱分解。特性氰基羥基亞氨基乙酸乙酯是一種白色固體，可溶于許多合成多肽時常用的溶劑，如二氯甲烷或二甲基甲酰胺（DMF）。在晶體中，該化合物以肟的形式存在，而在鹽或強堿性溶液中主要以陰離子形式的同分異構體存在。

由于簡單的制備方法，在80℃以下的非臨界行為，特別是由于所獲得的肽的高產率和低消旋化，氰基羥基亞氨基乙酸乙酯現在已被廣泛用作肽合成的添加劑。氰基羥基亞氨基乙酸乙酯可以在傳統的溶液中的多肽連接中用作偶聯添加劑，如在固相多肽合成的自動梅里菲爾德合成中。與耦合試劑如碳二亞胺（例如二環己基碳二亞胺（DCC））、二異丙基碳二亞胺（DIC）或水溶性的1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺（EDCI））一起使用。例如，使用來自N-保護的Z-L-α-苯甘氨酸（帶有芐氧基羰基，Z基）和L-纈氨酸甲酯與偶聯試劑DIC和添加劑氰基羥基亞氨基乙酸乙酯，分步液相合成二肽Z-L-Phg-L-Val-OMe，可獲得81-84%的LL產品，不含外消旋DL二肽。

最近，已經開發了各種氰基羥基亞氨基乙酸乙酯（Oxyma）的衍生物作為酰化試劑，如用于轉移芴甲氧羰基保護基的Fmoc-oxyma或偶聯試劑COMU，它以二甲基嗎啉-尿素鹽的形式易溶于水，與Oxyma一樣，在抑制外消旋和酰化效率方面優于標準添加劑HOBt，并且與HOAt相當，不會出現像苯并三唑類的爆炸風險。用氰基羥基亞氨基乙酸乙酯的水溶性衍生物（甘油丙酮-oxyma）作為添加劑，用DIC作為偶聯試劑，即使在弱堿性水溶液中，用Z-L-Phg-OH和L-H-Pro-NH2這兩種模型物質將受保護的氨基酸與寡肽連接起來，其產率為95%，非對映體過量為99%以上。在氨基酸的偶聯中，經常發生的次級反應在很大程度上被抑制，這將是對稱酸酐的形成、消旋化和外嵌化以及環化為噁唑啉酮或--特別是二肽--2,5-二酮哌嗪。