• 埃德曼降解

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    埃德曼降解

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    埃德曼降解,由PehrEdman開發,是一種對肽中的氨基酸進行排序的方法。在這種方法中,氨基末端的殘基被標記并從肽中裂開,而不破壞其他氨基酸殘基之間的肽鍵

    埃德曼降解的機理

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    氰酸苯酯與不帶電的N端氨基在弱堿性條件下反應,形成環狀苯基硫代氨基甲酰衍生物。然后,在酸性條件下,這個末端氨基酸的衍生物被裂解為噻唑啉酮衍生物。然后,噻唑啉酮氨基酸被選擇性地提取到有機溶劑中,并用酸處理,形成更穩定的苯硫醚(PTH)-氨基酸衍生物,可以用色譜法電泳法來鑒定。然后可以再次重復這個過程來鑒定下一個氨基酸。這種技術的一個主要缺點是,以這種方式被測序的肽不能有超過50至60個殘基(在實踐中,低于30個)。由于循環衍生化不一定能完成,所以肽的長度受到限制。衍生化問題可以通過在進行反應前將大肽裂解成小肽來解決。它能夠準確地對多達30個氨基酸進行測序,現代機器能夠對每個氨基酸的效率超過99%。埃德曼降解法的一個優點是它在測序過程中只使用10-100皮摩爾的肽。1967年,Edman和Beggs將Edman降解反應自動化,以加快這一過程,到1973年,全世界已有100臺自動化設備在使用。

    埃德曼降解

    局限性

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    因為Edman降解是從蛋白質的N端開始的,所以如果N端被化學修飾(如乙酰化或形成焦谷氨酸),它將無法工作。如果遇到非α-氨基酸(如異天冬氨酸),測序將停止,因為有利的五元環中間物無法形成。埃德曼降解法通常對確定二硫橋的位置沒有用。它還需要1皮摩爾或以上的肽量才能得到明顯的結果。

    耦合分析

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    在二維SDSPAGE之后,蛋白質可以被轉移到聚偏二氟乙烯(PVDF)印跡膜上進行進一步分析。埃德曼降解可以直接從PVDF膜上進行。N端殘基測序產生的5到10個氨基酸可能足以確定一個感興趣的蛋白質(POI)。

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    1. 埃德曼降解
    2. 埃德曼降解的機理
    3. 局限性
    4. 耦合分析

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