免疫組織化學

免疫組化學 (IHC) 是免疫染色最常見的應用。 它涉及利用抗體與生物組織中抗原特異性結合的原理，選擇性地識別組織切片細胞中抗原（蛋白質）的過程。

可以通過多種方式實現抗體-抗原相互作用的可視化，主要是以下任一方式：

• 顯色免疫組織化學 (CIH)，其中抗體與酶結合，例如過氧化物酶（該組合稱為免疫過氧化物酶），可催化產色反應。
• 免疫熒光，其中抗體被標記到熒光團，例如熒光素或羅丹明。

免疫組織化學染色廣泛用于診斷異常細胞，例如在癌性腫瘤中發現的細胞。免疫組化學也廣泛用于基礎研究，以了解和差異表達蛋白質在生物組織不同部位的分布和定位。

樣品的制備對于維持細胞形態、組織結構和目標表位的抗原性至關重要。 這需要適當的組織收集、固定和切片。 福爾馬林溶液通常用于固定組織，但也可以使用其他方法。

然后可以將組織切片或整個使用，具體取決于實驗目的或組織本身。 在切片之前，組織樣本可以包埋在介質中，如石蠟或冷凍介質。 切片可以在各種儀器上切片，最常見的是切片機、低溫恒溫器或振動切片機。 標本通常在 3 μm-5 μm 的范圍內切片。 然后將切片安裝在幻燈片上，使用濃度增加的酒精洗滌脫水，并在顯微鏡下成像之前使用二甲苯等溶劑清除。

根據固定和組織保存的方法，樣品可能需要額外的步驟來使表位可用于抗體結合，包括脫蠟和抗原修復。 對于福爾馬林固定石蠟包埋的組織，通常需要進行抗原修復，包括用熱或蛋白酶對切片進行預處理。 這些步驟可能會導致目標抗原染色或不染色之間的差異。

根據組織類型和抗原檢測方法，在抗體染色之前，可能需要分別封閉或淬滅內源性生物素或酶。 與靶抗原上的同源結合位點相似的蛋白質（也稱為反應位點）。 大量的非特異性結合會導致高背景染色，從而掩蓋目標抗原的檢測。 為了減少 IHC、ICC 和其他免疫染色方法中的背景染色，將樣品與緩沖液一起孵育，該緩沖液可阻斷一抗或二抗可能結合的反應位點。 常見的封閉緩沖液包括普通血清、脫脂奶粉、BSA 或明膠。 具有專有配方的商業封閉緩沖液可用于提高效率。 消除背景染色的方法包括稀釋一抗或二抗、改變孵育時間或溫度以及使用不同的檢測系統或不同的一抗。 質量控制應至少包括已知表達抗原的組織作為陽性對照和已知不表達抗原的組織的陰性對照，以及以相同方式探測但省略一抗（或更好 ，一抗的吸收）。

用于特異性檢測的抗體可以是多克隆抗體或單克隆抗體。 多克隆抗體是通過給動物注射感興趣的蛋白質或肽片段，并在刺激二次免疫反應后，從全血清中分離抗體來制備的。 因此，多克隆抗體是識別多個表位的抗體的異質混合物。 單克隆抗體是通過注射動物，然后采集特定的免疫組織樣本，分離親本細胞，并使用由此產生的永生細胞系來產生抗體來制備的。 這導致抗體顯示出對單個表位的特異性。