血細胞計數板

血細胞計數板，也稱為血細胞計數器，用于對顆粒懸浮液中所有類型的小顆粒進行光學顯微鏡計數。 細胞計數板特別用于醫學和生物學中細胞（如紅細胞、白細胞）和微生物的定量。

原則上，血細胞計算板是一個中間空間的虛擬部分，由兩個間隔很小的平行平行玻璃表面界定。 血細胞計數板形成在玻璃板上，類似于用于光學顯微鏡檢查的載玻片。 然而，它更厚（約 5 毫米）并且具有特殊的表面設計。 一塊薄的、經過精密研磨和拋光的玻璃板，即所謂的蓋板玻璃，放置在一定高度處，平行于較厚、較大的底板。 底板表面上的線標記標記了底座和蓋玻片底面之間的空間，其體積由標記的底座和底座與蓋玻片底面之間的距離（腔室高度）決定。 這個已知體積的空間是實際的血細胞計算板。 如果在將顆粒懸浮液引入該室后，用顯微鏡對標記體積中存在的顆粒進行計數，則顆粒的濃度由它們的數量和體積得出。

血細胞計數板的底板由特殊的光學玻璃制成，具有普通透射光顯微鏡載玻片的尺寸，即：76 mm × 26 mm，但厚度約為 5 mm。 底板的表面被平行于窄邊銑出的凹槽分成 2 個寬區域（外側）和 3 個窄條（內側）。 與用于銘文的兩個外部區域相比，鋼條被打磨平整并拋光。 中央腹板（腔室地板）比位于其側面的兩個腹板低血細胞計數板的高度。 這兩個脊形成了蓋玻片的支撐（載體脊）。 如果將蓋玻片放在這兩個條上，則其下表面位于中間條（腔室底部（腔室地板））表面上方的預期高度（腔室深度）。 分隔預期體積的標記刻在底座上。 底座（腔室地板）和蓋玻片底面之間的空間以及底座上的線條標記定義了血細胞計數板的體積。

中間桿的室底板通常比兩個外側桿低 0.1 mm（室深度）。 對于細菌等非常小的顆粒，腔室深度僅為 0.02 毫米。 在血細胞計數板的底部中間有一個線網（計數區，計數網格），根據腔室的類型而有所不同。 通常，刻有兩個計數網格，它們之間由凹槽隔開。 待計數體積的橫向邊界由垂直投影到計數網格邊界線上的假想平面形成。 細胞計數板的蓋玻片與普通光學顯微鏡的蓋玻片不同，它們的表面經過研磨和拋光。 此外，它們比普通蓋玻片稍厚，因此它們不會因毛細管力而偏轉。 根據血細胞計數板的類型，它們的尺寸（長×寬）為24毫米×24毫米、20毫米×26毫米或22毫米×30毫米，厚度均為0.4毫米。

由于血細胞計數板常被用來測定血細胞濃度，因此它們也被稱為血球計數器，蓋玻片也被稱為血細胞計數器蓋玻片。

使用前，腔室應盡可能沒有灰塵、棉絨和細胞。 要正確放置蓋玻片，請稍微用力（注意，有破損的風險！）以橫向格式將其推到兩個載體網上。 如果蓋玻片正確地固定在載體網上，就可以看到所謂的牛頓干涉色。 這意味著載體網和覆蓋玻璃之間的空間高度在光波長的數量級，因此可以忽略不計。 在這種狀態下，當血細胞計數板傾斜時，蓋玻片不會滑動。

將待計數的顆粒懸浮液移至蓋玻片就位的一側，并通過毛細管力吸入該空間。 顆粒懸浮液因此散布在精確已知厚度的層中。 在光學顯微鏡下用透射光對計數場上的顆粒進行計數后，可以計算出它們在單位體積內的數量。 對于細胞，除了染色外，還可以使用相差顯微鏡進行更好的識別。

使用后，應在腔室和蓋玻片上仔細涂抹從無絨一次性布中取出顆粒懸浮液，用 70% 2-丙醇或類似的消毒劑清潔并干燥。 蓋玻片尤其必須小心處理，因為它是磨平的，因此比普通蓋玻片貴很多。

根據要計數的顆粒類型，對一定數量的大方塊或組方塊進行計數，并從中得出平均值。 如果將該值乘以適當的系數（方形面積與腔室高度的乘積的倒數），則獲得每單位體積的顆粒數。 計數時，重要的是不要對位于邊界線上的粒子計數兩次。 計算一個正方形時，習慣上只計算兩條邊界線上的粒子（例如頂部和左側），而不計算其他兩條線上的粒子。 在計數之前，建議在低倍率下查看整個網格線，并檢查粒子是否相當均勻地分布在方塊上。 否則，應再次搖勻顆粒懸浮液并重新應用。 不均勻的分布也可以通過以下事實來識別：當計算幾個方格時，每方格的顆粒數波動很大。

在高顆粒濃度（例如酵母懸浮液）的情況下，必須通過稀釋建立可計數性。 每個小方塊的目標是大約 1 個顆粒。

為此，計算 4 個大角方塊并將該數字除以 4 以獲得每個角方塊的平均值。 該值乘以 10 以獲得每微升（微升）的細胞數。 系數 10 的結果是每個角方塊的面積為 1 mm2，腔室高度為 0.1 mm，即一個角方塊對應 0.1 μl 的體積（1 mm2 × 0.1 mm = 0.1 mm3）。。 因此，每個角正方形的電池數量，即每個 0.1 立方毫米，乘以每立方毫米的電池數量 10。 在將細胞懸浮液應用于腔室之前（必須）進行相應的稀釋，當然也必須考慮在內。

減少這樣的較小細胞的數量。 B. 為了確定細胞培養物中的紅細胞或 CHO 細胞，將 5 個方格計數四次，并確定 5 個方格的平均值。 這個數字乘以 50 得到每微升的細胞數 (1 / (5 × 0.04 mm2 × 0.1 mm) = 50)。 在這里，也必須考慮任何先前進行的稀釋。